總大腸菌群是一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧、革蘭氏陰性的無芽孢桿菌?？偞竽c菌群主要來源于人畜糞便，是水源是否受到糞便污染的主要標(biāo)準(zhǔn)。目前，總大腸菌群是國內(nèi)外檢測(cè)生活飲用水污染情況的重要指標(biāo)?？偞竽c菌群作為評(píng)價(jià)飲用水衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，它的檢測(cè)具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。目前，中國環(huán)保部門檢測(cè)總大腸菌群的方法主要有多管發(fā)酵法(Multiple-tube fermentation, MTF)、濾膜法(Membranefilter, MF)、快速紙片法(Paperstrip method)。其中發(fā)酵法是傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，這種檢測(cè)技術(shù)普遍得到了世界各國的應(yīng)用。該檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)原理簡單，檢測(cè)人員經(jīng)過基本的微生物學(xué)培訓(xùn)就可以操作。濾膜法檢測(cè)總大腸菌群成本較低，操作步驟比較簡單。

快速紙片法以其操作簡便、檢測(cè)周期短等優(yōu)點(diǎn)目前備受檢測(cè)人員的青睞，多管發(fā)酵法和濾膜法目前已經(jīng)被世界各國實(shí)驗(yàn)室和世界各組織機(jī)構(gòu)認(rèn)可，這3種方法已經(jīng)被認(rèn)定為國家標(biāo)準(zhǔn)方法。

多管發(fā)酵法、濾膜法和快速紙片法應(yīng)用于總大腸菌群檢測(cè)中，都能準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)水樣受到總大腸菌群污染的狀況，但是3種方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)際檢測(cè)中應(yīng)該根據(jù)具體情況分析選擇適合的檢測(cè)方法。通過對(duì)總大腸菌群檢測(cè)方法的分析比較，多管發(fā)酵法準(zhǔn)備工作量大，操作復(fù)雜，周期長，不適于大量樣品的分析，也不能對(duì)水的衛(wèi)生學(xué)狀況作出快速評(píng)價(jià)，無法滿足樣品快速檢測(cè)的需求。濾膜法是一種科學(xué)可行的檢驗(yàn)方法，適用于飲用水和混濁度較小的水樣。快速紙片法操作簡便、檢測(cè)周期短，也已經(jīng)列入生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，極有可能在近期成為評(píng)價(jià)水質(zhì)污染的快速檢測(cè)方法之一。

濾膜法檢測(cè)周期較短，最短只需要24 h，并且不需要驗(yàn)證試驗(yàn)。在本試驗(yàn)中，濾膜法較其他兩種方法檢測(cè)結(jié)果偏低，原因是菌落在濾膜上分布不均勻，導(dǎo)致菌落辨別時(shí)存在干擾?？焖偌埰z測(cè)總大腸菌群成本較高，但檢測(cè)結(jié)果可靠，能夠較精確地判斷水樣的污染狀況。從檢測(cè)結(jié)果來看，3種方法檢測(cè)結(jié)果無顯著差異，但是快速紙片法檢出率陽性略高于發(fā)酵法和濾膜法，因此可以推斷快速紙片法的敏感性略高于發(fā)酵法和濾膜法。

對(duì)多管發(fā)酵法、濾膜法和快速紙片法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，在120份水樣中，多管發(fā)酵法共檢出總大腸菌群23份，濾膜法共檢出總大腸菌群21份，采用快速紙片法共檢出總大腸菌群25份，3種不同方法對(duì)比，檢測(cè)結(jié)果無顯著差異(P>0.05)。

多管發(fā)酵法和濾膜法是傳統(tǒng)的檢測(cè)大腸菌群的方法，缺點(diǎn)是操作步驟比較繁瑣，檢測(cè)周期長，干擾因素多，并且需要進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。但是這類檢測(cè)方法操作技術(shù)比較簡單，容易進(jìn)行，并且檢測(cè)費(fèi)用低。尤其是多管發(fā)酵法，目前仍然是水體污染監(jiān)測(cè)中最主要的檢測(cè)方法。快速紙片法克服了前兩種檢測(cè)方法的不足，優(yōu)化了檢測(cè)過程?？焖偌埰ú僮鞲啽?，檢測(cè)時(shí)間短，無須提前準(zhǔn)備培養(yǎng)基，并且不需要進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，能夠準(zhǔn)確地判斷水樣的總大腸菌群污染狀況，并且此種方法已經(jīng)被列為國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法。

快速紙片法是以紙片作為培養(yǎng)基載體，將總大腸菌群生長過程所需要的營養(yǎng)物質(zhì)、指示劑以及能夠抑制革蘭氏陽性細(xì)菌生長的物質(zhì)附著在紙片上，細(xì)菌在繁殖時(shí)，在37℃下培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。試驗(yàn)過程中，每個(gè)水樣按3個(gè)10倍濃度梯度接種，共接種15張紙片。其中5張大紙片接種10 m L水樣，5張小紙片接種1 mL水樣，另外5張小紙片接種1∶10稀釋水樣1 mL。紙片上出現(xiàn)紅斑或者紅色菌落而且周圍變黃色的為陽性。根據(jù)陽性紙片張數(shù)，查MPN值表，然后計(jì)算每升水樣中總大腸菌群數(shù)的最近似值。

將水樣注入已滅菌的濾器中，采用0.45μm的微孔濾膜過濾水樣，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌被截留在膜上，然后將濾膜貼于M-FC(品紅亞硫酸鈉)培養(yǎng)基上，在37℃下培養(yǎng)24 h?？偞竽c菌群在濾膜上長出黃色的特征菌落，直接計(jì)數(shù)此類菌落數(shù)目，計(jì)算每升水樣中含的總大腸菌群數(shù)。對(duì)于可疑的菌落，可取一部分進(jìn)行涂片、染色、鏡檢。另一部分接種于EC培養(yǎng)液內(nèi)，經(jīng)37℃培養(yǎng)24 h后觀察是否產(chǎn)氣，如果產(chǎn)氣則證明為總大腸菌群。然后計(jì)算每升水樣中總大腸菌群數(shù)的最近似值。

利用總大腸菌群繁殖時(shí)能夠發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃，同時(shí)產(chǎn)生氣泡。初發(fā)酵試驗(yàn)：將水樣充分混勻后，根據(jù)水樣污染的程度進(jìn)行適當(dāng)稀釋。取每個(gè)樣品1.00、0.10、0.01 mL分別接種到盛有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中，在37℃下培養(yǎng)24 h。產(chǎn)酸和產(chǎn)氣的發(fā)酵管試驗(yàn)結(jié)果表明，水樣中存在可疑菌群。復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：將可疑菌落繼續(xù)接種到EC培養(yǎng)基上并在37℃培養(yǎng)24 h，在培養(yǎng)期間如果仍然產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則認(rèn)定可疑菌落為總大腸菌群。依據(jù)陽性發(fā)酵管的數(shù)量查MPN表，計(jì)算每升水樣中總大腸菌群數(shù)的最近似值。

本研究通過對(duì)比分析多管發(fā)酵法、濾膜法以及快速紙片法檢測(cè)生活飲用水中總大腸菌群的試驗(yàn)結(jié)果，探討3種方法在生活飲用水中的總大腸菌群檢測(cè)中的應(yīng)用情況。